Mich TLX DNA-seq kit (illumina Compatible)
適用于起始量 1 ng-200 ng 的 DNA 樣本
采用截短型接頭，可有效減少非特異性擴(kuò)增
能夠快速構(gòu)建文庫(kù)，2.5-3.5小時(shí)完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程
經(jīng)Illumina 測(cè)序平臺(tái)驗(yàn)證
- 產(chǎn)品信息
- 使用流程
- 注意事項(xiàng)
- 產(chǎn)品說(shuō)明書
產(chǎn)品描述
Mich TLX DNA-seg kit (illumina Compatible) 是為 illumina 平臺(tái)設(shè)計(jì)的 DNA 文庫(kù)準(zhǔn)備試劑盒,適用于起始量 1 ng-200 ng 的 DNA 樣本，試劑盒經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)和優(yōu)化，能夠快速構(gòu)建文庫(kù)(2.5-3.5小時(shí))，有高效的文庫(kù)轉(zhuǎn)化率與擴(kuò)增效率，已經(jīng)經(jīng)過(guò)多樣本驗(yàn)證可獲得優(yōu)異的文庫(kù)與測(cè)序數(shù)據(jù)，可用于石蠟包埋組織 DNA 樣本建庫(kù)。試劑盒包含了 DNA 片段化和末端修復(fù)加 A尾的預(yù)混液、連接預(yù)混液、高保真擴(kuò)增預(yù)混液、短接頭和含有 INDEX 的 PCR 引物(可以根據(jù)客戶要求進(jìn)行選配)。
(注意: 本試劑盒不可直接用不帶 INDEX 的引物進(jìn)行 PCR 反應(yīng))。
產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
| NGS 0602-8 | MICH TLX DNA-seq kit (illumina Compatible) | 8 rxns |
| NGS 0602-24 | MICH TLX DNA-seq kit (illumina Compatible) | 24 rxns |
| NGS 0602-96 | MICH TLX DNA-seq kit (illumina Compatible) | 96 rxns |
產(chǎn)品組分
| 名稱 | 體積(NGS 0602-8) | 體積(NGS 0602-24) | 體積(NGS 0602-96) |
| TLX Buffer Mix | 38 μL | 112 μL | 448 μL |
| TLX Enzyme Mix | 30 μL | 89 μL | 356 μL |
| TLX ligase Enzyme | 20 μL | 56 μL | 224 μL |
| TLX ligase Buffer | 76 μL | 224 μL | 896 μL |
| TLX Adapter for ILM | 20 μL | 56 μL | 224 μL |
| PCR Master Mix | 96 μL | 280 μL | 1120 μL |
一、關(guān)于操作
請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
使用前請(qǐng)將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。
混勻時(shí)請(qǐng)輕輕吹打或輕輕振蕩，劇烈振蕩可能會(huì)造成文庫(kù)產(chǎn)出下降。
為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的一次性槍頭。
推薦在帶熱蓋的 PCR 儀中進(jìn)行各步驟反應(yīng)，使用前應(yīng)預(yù)熱 PCR 儀至反應(yīng)溫度附近請(qǐng)?jiān)跐崈舻膶?shí)驗(yàn)環(huán)境下實(shí)驗(yàn)，避免污染。
二、TLX Adapter for ILM說(shuō)明
TLX Adapter for ILM 采用短接頭模式。
接頭濃度: 15 uM；直接用于相應(yīng)建庫(kù)試劑盒連接體系里即可。
-20°C保存，使用前提前融化，盡量低溫融化，避免在超過(guò) 30°的環(huán)境中融化。
建庫(kù)推薦使用量: 常規(guī) DNA投入量 100-200 ng,2uL/rxns; 其他 DNA 投入量需要適當(dāng)調(diào)整接頭使用量。
三、關(guān)于磁珠純化與分選
DNA 片段選擇步驟可在接頭連接后或文庫(kù)擴(kuò)增后進(jìn)行。
當(dāng)Input DNA質(zhì)量> 50 ng，建議在接頭連接后分選；如Input DNA 質(zhì)量 <50 ng，可在文庫(kù)擴(kuò)增后進(jìn)行分選。
TLX Ligase Buffer 包含高濃度的 PEG，對(duì)雙輪磁珠分選產(chǎn)生顯著影響。因此，當(dāng)在接頭連接后進(jìn)行片段選擇，須先進(jìn)行純化步驟，再進(jìn)行雙輪分選步驟，如在文庫(kù)擴(kuò)增后進(jìn)行片段選擇，可直接進(jìn)行雙輪磁珠分選步驟。
磁珠使用前應(yīng)先平衡至室溫，并混勻再使用，否則會(huì)導(dǎo)致得率下降。
80%乙醇應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，否則將影響回收效率。
6進(jìn)行片段選擇時(shí)，初始樣品體積應(yīng)盡量> 100 uL，初始樣本體積越大，片段選擇效果越好。
四、關(guān)于文庫(kù)擴(kuò)增
文庫(kù)擴(kuò)增循環(huán)數(shù)與文庫(kù)產(chǎn)量和文庫(kù)質(zhì)量有直接關(guān)系，請(qǐng)參照下表列舉的本試劑盒設(shè)置擴(kuò)增 循環(huán)數(shù)，并摸索合適的循環(huán)數(shù)。
五、關(guān)于文庫(kù)質(zhì)檢
通常情況下，構(gòu)建好的文庫(kù)可通過(guò)長(zhǎng)度分布檢測(cè)和濃度檢測(cè)來(lái)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。
文庫(kù)濃度檢測(cè)可使用：基于雙鏈 DNA熒光染料的方法，如Qubit或 gPCR 絕對(duì)定量的方法。
文庫(kù)長(zhǎng)度分布檢測(cè)，可通過(guò) Agilent Bioanalvzer 2100 等基于毛細(xì)管電泳或微控流原理的設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。
